[专家论著]补肾活血法对多囊卵巢综合征患者月经周期及生殖激素影响的研究

    【摘 要】目的：探讨补肾活血中药对PCOS患者月越周期及生政欲素的形响。方法：现察10例 PCOS患者采用补肾活血法治疗前后月经周期的变化，同时栓侧血清性激素含全并B超观察卵巢的史化。同时，观察补肾活血中药对体外培养PCOS患者卵巢细胞E2、T分泌的影响。结果：补肾活血中药对PCOS忠者的月经周期有明显的调整作用，明显降低卵巢最大切面面积及闭锁卵泡数目(P均<0.05)，显著改善性激素水平。体外实脸结果表明中药以500ng/ml浓度对卵巢颗粒细胞E2分泌功能的促进作用明显，各浓度对T的分泌均有明显抑制作用。结论：补肾活血法可明三改善PCOS患者的月经周期及生殖激素水平。

    【主题词】多盆卵巢综合征/中医药疗法  补肾活血方/治疗应用 雌二醇/血液 睾酮/血液 人类

     中医认为多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome PCOS)基本病理胭肾虚

     血瘀[1]。为探讨中医药治疗PCOS的作用机理，本研究通过对 PCOS患者及体外培养 PCOS患者卵巢颗粒细胞采用中医补肾活血法干预，从临床和实验角度同时观察中药的影响作用，现将结果报道如下。

    I 临床研究

    11 移床贵料

    1.1.1 一般资料 2003一04-2003一05开始在湖南中医学院附属第一医院门诊自愿接受单纯中药治疗观察的10例PCOS患者，观察随访至2004一09，年龄 20一36岁，平均30.4岁;病程1一5年，平均 2.5年;均有月经稀发或闭经史，2例有正常妊娠史，3例为自然流产史后不孕,2例原发不孕，3例未婚。所有病例均排除肾上腺、甲状腺疾病 观察前 3个月未用过任何激素类药物。

    1.1.2 诊断标准 ①月经稀发或闭经半年以上;②女性激素 LH/FSH > 2.5;③ B超下卵巢有多囊性变;④肥胖;⑤痤疮;⑥多毛;⑦BBT单相或不典型双相。①②③必备，④⑤⑥⑦具备2项以上即可诊断。

    1.2 方 法

    1.2.1 治疗方法 补肾活血法基本方药组成:紫石英30g(打碎先煎 lh),菟丝子 l0g,桑寄生l0g，地龙l0g，路路通l0g,泽兰l0g,泽泻l0g。多毛痤疮加生地15g、黄柏l0g；卵巢增大加三棱l0g、获术l0g。自月经周期或撤药性出血第5天开始服药，每日1剂，连服7天停药，每月 1次，连服3个月为1疗程 。

    1.2.2 观察指标 ①基础体温(BBT);②月经周期 停药后随访 3个月判定疗效;)B超下卵巢最大切面及囊泡数目，BBT双相者在月经周期第 9一11天行卵巢 B超复查。单相者服药 3个疗程后进行复查，观测卵巢最大切面面积及卵泡数目(以2-8mm 为计数对象)。要求由同一仪器同一观察者进行;④服药前(闭经或 BBT单相者初次就诊时)及服药后末次月经第2一5天晨 8一10时空腹抽静脉血.分离血清冻存于一80℃冰箱，收齐所有标本后放免法检测LH,FSH,T,Fz，试剂盒由北京东雅生物技术研究所提供。

    1.2.3 统计学处理检验。

    1.3 结果

    1.3.1 临床疗效  所有患者服药前平均月经周期为(48±343)天，服药1疗程周期恢复正常(27一35天)者 1例，2疗程恢复规则月经者2例(25-28天),3疗程恢复规则月经者 3例(30天)，以上患者BBT均转为典型双相，提示有排卵，其中5例有生育要求者中3例受孕，观察结束时停经已70-95天。4例 3个疗程后仍为单相，抽血查女性激素后加用西药克罗米酚治疗。

    1.3.2 治疗前后B超下卵巢及卵泡变化 有9例患者服药前后接受双侧卵巢B超检查，治疗前后卯巢最大切面大小及卵泡数目均有显著变化

    1.3.3 血清性激素变化 治疗前后 LH,F5H,E均有较显著变化(P<0.05或0.01)，而 T虽有降低，但无明显统计学意义{P>0.05)。

    2 实脸研究

    2.1 实验材料 超净工作台(苏州生产，型号 SW一CI -2FD),COz培养箱(德国贺利氏生产，型号 Heracell)相差显微镜(重庆光电仪器总公司生产，型号XDS一1B),实体显微镜;24孔培养板;胎牛血清(福州 四季青),1640培养液(Sigma)产品)，台盼兰(Amresco公司产品);女性激紊RIA检测试剂盒(北京东雅生物公司)。

    22 实脸方法

    2.2.1 补肾活血法方药制备 冤丝子l0g,紫石英30g桑寄生l0g,地龙l0g，路路通l0g,共70g，先将紫石英加水300.1煎煮1h,再放人余药加水至500.1,煎煮 1h,滤液弃药渣，再浓缩至100.1,按含药浓度7g/.1，用无血清1640培养液稀释至1000ng/ml,500ng/ml,1000ng/ml 3个浓度，0.22滤膜过滤后密封，于4℃保存,1周内使用。

    2.2.2 细胞培养 PCOS患者腹腔镜下打孔术中采取少且卵巢组织，立即放人含有三抗(青霉素 100a/ml、链霉素 100u/ml、两性霉素 B2.5/ml)1640培养液中转移至实验室，超净工作台上移人PBS液中清洗2一3次，剥离接近卵巢表面的卵泡放人培养皿:①刺破卵泡.释放出颗粒细胞，反复用少最培养液冲洗卵泡壁使颗粒细胞释放千净 800r/nun x 6min离心清洗细胞2次后 1640培养掖稀释，台盼蓝计数活细胞数>95%，用含 10%胎牛血清(FBS)164()培养掖调浓度至(1-2) ×105/m1后，按每孔0.5ml依次放人24孔塑料培养板，37T:5%C02培养箱预培养 ，h细胞贴壁，吸弃培养液后分组换千预因素0.5.1:补肾活血法方药高、中、低浓度各重复6孔，无药 1640培养液对照组 6孔，继续培养24h后收集各孔培养液，一20℃冻存备测 甄,T,实验重复 2次。

     2.2.3 检测指标  各孔收集3管培养液每组共36个样本，放免法检测雌二醇(F2)和皋酮(T)值。

     2.3 结果 不同浓度补肾活血中药对体外培养 PCOS患者卵巢颗粒细胞 E2,T分泌的影响。

     3 讨论

     PCOS月经不调和不孕的核心病机是由于高雄激素血症所致的卵泡不能发育成熟和卵泡壁的过度增生不能破裂导致卵泡闭锁，故 目前西药治疗主要采用达因一35抗雄激素后再用克罗米酚促排卵，治疗周期较长[2] ，排卵率虽高，但妊娠率不高，且容易发生流产[3]。中医认为卵子是生殖之精，卵子的发育成熟与肾精充盛密切相关，卵子的正常排出又有赖于肾阳的鼓动以使冲任气血调畅。肾精亏虚使卵子缺乏物质基础，难以发育成熟;肾阳亏虚既不能鼓舞肾阴的生化和滋长，又使气血运行无力而密滞冲任胞脉，更使排卵缺乏原动力。故肾虚是排卵障碍的根本原因。肾虚又进一步导致阴阳气血失常，水湿内停，痰湿内生，塞阻冲任胞脉气血齐滞成痛，使卵子难以排出、卵巢增大;故肾虚血挤是 PCOS的基本病机。方中紫石英温通下焦阳气.调畅气血;桑寄生填精补血以滋补冲任之本;菟丝子补肾益精，健脾固任，既补肾阳，又滋肾阴。三药合用，能使肾阴得养，肾阳得化。生殖之精充足，生殖之力充沛 卵子得以发育成熟。地龙咸寒，以下行为主，功擅通经括络，清热利尿，其寒凉之性，又可抑制紫石英之温燥;路路通苦辛性平疏泄，偏人下焦肝肾，具活血利水调经之功;泽兰、泽泻进一步加强活血利水之力。

      现代药理研究表明，紫石英主含氟化钙，能兴奋中枢神经，促进卵巢分泌，研究发现，在排卵前 LH高峰的介导下，大鼠卵母细胞-卵丘复合体 Ca2+升高，用Ca2+载体能促进卵泡中的卵母细胞成熟，而去除细胞外 Ca2+则抑制LH介导的卵母细胞成熟，说明钙离子在卯母细胞成熟中起着重要作用[4];桑寄生和芜丝子[5]都含獬皮素等多种黄酮类成分，具有抗氧化，保护生物膜及调节生殖内分泌等作用。地龙主含纤溶酶原，同时还含多种氨基酸、金属元家及钙结合蛋白(钙调索)等成分，其纤溶酶与纤维蛋白溶解酶作用相似，既有直接纤溶作用，又可间接激活纤溶酶;刺激血管内皮细胞释放tPA激活剂;而钙调素通过介导Ca2+信号传递，调节着休内20多种酶的活性，对维持细胞的生理功能起重要作用[6]。这也是本方在临床上治疗 PCOS取得疗效的科学基础。本临床研究说明，补肾活血法治疗PCOS在促进排卵的同时也编小了卵巢体积和减少了闭锁卵泡的发生，其对卵巢的影响似乎是通过调整女性生殖轴的内分泌功能而发挥作用的，尤其对垂体激素(FSH,LH,LH/FSH)和雌激素(E2)的影响比较显著。

       现代医学对多囊卵巢的局部病理生理研究发现，颗粒细胞功能障碍是PCOS发生的重要原因，卵巢顺粒细胞产生芳香化醉，催化雄激素转化为雌激素，而雌激素是卵子成熟的必要条件，且在优势卵泡的形成和排卵过程中起决定性作用。本研究观察了中药对体外培养卵巢颗粒细胞分泌E2,T的影响，初步发现，与1640培养组比较，以500ng/ml浓度对颗粒细胞的凡分泌功能有明显促进作用，而 100ng/ml,1000ng/ml则影响不大;各组对T均有一定程度的影响，检测结果显示T水平明显低于164。组。因T的产生主要来自于卵泡膜细胞，本研究中药对颗粒细胞中T浓度的影响机制是否是由于刺激了芳香化酶的作用使E2合成增加尚待进一步探讨。

     □作者：福州东南妇产医院不孕不育研究中心  傅颖  宋琳  穆香芝